DNA RECOMBIANTE

DNA RECOMBIANTE EN LA NATURALEZA

Los ácidos grasos omega-3 son productos del metabolismo secundario, esenciales para el crecimiento. La producción de ácido eicosapentaenoico (EPA, 20: 5ω3) por una nueva especie de bacteria marina Shewanella electrodiphila MAR441T. 

Esta cepa produjo un alto porcentaje (hasta 26%) de ácidos grasos totales y altos rendimientos (mg / g de biomasa) de EPA por debajo de la temperatura óptima de crecimiento. A temperaturas de crecimiento más altas, estos valores disminuyeron enormemente. La cantidad de EPA producida se vio afectada por la fuente de carbono, que también influyó en la composición de ácidos grasos. Esta cepa requirió Na + para el crecimiento y la síntesis de EPA y las células cosechadas a finales de fase estacionaria exponencial o temprana tenían un contenido de EPA más alto. Tanto la mayor cantidad (20 mg g-1) como el mayor porcentaje de EPA (18%) ocurrieron con crecimiento en L-prolina y (NH4) 2SO4. La adición de cerulenina mejoró aún más la producción de EPA a 30 mg g-1. La mutagénesis química utilizando NTG permitió el aislamiento de mutantes con niveles mejorados de contenido de EPA (de 9,7 a 15,8 mg g-1) cuando se cultivaron a 15 ° C. 

DNA RECOMBINANTE ARTIFICIAL EN LA CIRROSIS

La proteína 1 de dedos de cinc y homeoboxes (ZHX1), se localiza en el núcleo de la célula y parece actuar como un represor transcripcional. ZHX1 interactúa con la subunidad α del factor nuclear α (NF-YA), ADN metiltransferasas (DNMT) 3B y ZHX2, todas las cuales están involucradas en la tumorogénesis.Se creo un plásmido recombinante de expresión eucariota que contiene el gen humano ZHX1 (hZHX1) e investigar las actividades biológicas de ZHX1 en el carcinoma hepatocelular que es una afección directa derivada de la cirrosis hepática. Se usó la reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR) para amplificar los fragmentos N y C-terminales (ZHX1-N y ZHX1-C, respectivamente) del gen hZHX1. Los dos fragmentos de PCR se clonaron en el vector pEASY-T1 y se subclonaron en el plásmido pcDNA3 para generar un plásmido pcDNA3-ZHX1 recombinante . 

Después de la identificación por digestión enzimática y secuenciación del ADN , el plásmido recombinante pcDNA3-ZHX1 se transfectó en células SMMC-7721. El nivel de expresión de ZHX1 se detectó mediante RT-PCR y análisis de transferencia Western. Se usaron ensayos de curvas de crecimiento celular para evaluar el efecto de ZHX1 en la proliferación celular. Además, la expresión diferencial de ZHX1 entre el cáncer y el tejido hepático cirrótico adyacente se investigó mediante PCR cuantitativa (qPCR). La digestión enzimática y la secuenciación del ADN confirmaron la construcción exitosa del plásmido recombinante, pcDNA3-ZHX1. qPCR y el análisis de transferencia Western demostraron que ZHX1 se expresó de manera eficiente en células SMMC-7721 y la sobreexpresión de ZHX1 puede inhibir la proliferación de células SMMC-7721. Además, la expresión reducida de ZHX1 está muy extendida entre los tejidos cancerosos de los pacientes con HCC. En conclusión, se construyó con éxito un plásmido de expresión eucariota recombinante , pcDNA3-ZHX1. Además, los resultados actuales indican que una baja expresión de ZHX1 puede ser responsable de la hepatocarcinogénesis derivada de cirrosis hepática.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. PubMed. Construction of a recombinant eukaryotic human ZHX1 gene expression plasmid and the role of ZHX1 in hepatocellular carcinoma.Actualizado: 8 de noviembre del 2013, Último acceso: 4 de diciembre del 2017. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24064680

2. PubMed. Enhanced eicosapentaenoic acid production by a new deep-sea marine bacterium Shewanella electrodiphila MAR441T. Actualizado: 8 de noviembre del 2013, Último acceso: 4 de diciembre del 2017. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29176835