PRUEBAS DE PCR

Estudios recientes han identificado que la expresión del receptor LAIR-1 en las células gigantes del hígado (macrófagos), tienen implicaciones en el desarrollo de cirrosis hepática, además de estar implicado en alteraciones del factor de crecimiento TGF-B1.

Las tipo de PCR que son utilizadas son la qRTPCR y la PCR-AMP , esta buscan analizar los polimorfismos de TGF B1 en la cirrosis buscando en genotipos de 3 diferentes polimorfismos (dos en el gen COLIA1 y uno en el COLIA2), mediante la amplificación de las regiones correspondientes por PCR. Para esto se usa una muestra de sangre donde buscamos macrófagos derivados de monocitos (M-DM),  peritoneales del líquido ascítico y (M-DM) de sangre periférica.

Entre los principales tipos de ácidos nucleicos que se analizaran son: ARN viral----RT---- ADNc, la extracción de losmismo se realiza con un Kit comercial normal

Extracción de acido nucleico:

Lisis                                  kit RNeasyMini kity        

Separación                      kit” Superscript II                          

Purificación                     Reverse Transcriptase”                    

GEN a amplificar: LAIR-1ª y LAIR-1b

TGFB1

TIPO DE PCR: qRTPCR - PCR-AMP

PASOS:

D- 95º por 5 min 35 ciclos

H- 64-45s

E- 72º por 1 min

VISUALIZACIÓN: EFO - Electroforesis

1.- Simplicidad y rapidez: El tiempo de realización del diagnóstico va a depender en gran medida del método empleado en la extracción de ADN a partir de las muestras clínicas. En los casos más sencillos, el resultado final del diagnóstico de varias muestras clínicas puede obtenerse al cabo de las 3 a 6 horas tras su recepción en el laboratorio, sin la necesidad de aislamiento previo del agente.

2.- Especificidad: La especificidad de la reacción de PCR está condicionada por el carácter restrictivo del fragmento de ADN a amplificar entre las estirpes de una misma especie, entre las especies de un mismo género y entre un grupo de microorganismos filogenéticamente relacionados.

3.- Sensibilidad: Una de las ventajas de la PCR es que tanto la cantidad como la calidad del ADN a amplificar, no necesitan ser muy altas. El ADN extraído a partir de una única célula, puede ser suficiente para una buena reacción de amplificación.

4.- Alternativas a la detección tradicional: desde el punto de vista del diagnóstico, la distinción entre microorganismos muertos y vivos puede ser de especial importancia en el control de algunas enfermedades infecciosas.

5.- Los ensayos moleculares, son altamente específicos debido a que detectan la secuencia genética única del patógeno buscado. Incluso se pueden distinguir variedades de patógenos de la misma especie.

BIBLIOGRAFÍA:

1. PubMed. Leukocyte associated immunoglobulin like receptor 1. Actualizado: 5 de noviembre del 2017, Último acceso: 26/11/2017. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/39032. Duque-Jaramillo A,  Julio C Rendón, Fabián Cortés-Mancera, Correa G, Restrepo JC, Hoyos S, Navas MC. Infección oculta por el virus de la hepatitis B en pacientes sometidos a trasplante hepático/ Occult Hepatitis B Virus Infection in Liver Transplant Patients. SciELO. Actualizado: 21 de mayo del 2016, Último acceso: 26/11/2017. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0120-99572016000400004&script=sci_abstract&tlng=es